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植物激素检测难点及优势
- 2020-01-13-

      难 点 :  

      1、作为植物次生代谢产物,在植物体内含量极低

      一般鲜样中的含量为 0.1 ~ 50 ng·g - 1(通常在 ng/g,甚至 pg/g 水平上),仅相当于其他类次生代谢产物(如黄酮类)的万分之一;

      2、不同样本含量差异大

      3、基质复杂,干扰严重

     基质效应由分析物的共流出物影响电喷雾接口的离子化效率所致,表现为离子增强或抑制作用。基质效应是由于样品基质与被测物在形成气相离子的过程中产生竞争的结果。

共流出干扰物可分为内源性杂质和外源性杂质。内源性组分是指样品提取过程中同时被提取出来的有机或无机分子,包括离子颗粒物成分(电解质、盐类)、强极性化合物(酚类、色素)和各种有机化合物(糖类、胺类、尿素、脂类、肽类及其分析目标物的同类物及其代谢物)。其中磷脂是主要的内源性组分,而外源性组分主要是由前处理带来,如塑料、有机酸、缓冲盐等。内源性杂质一般与不同的样品基质有关,所以不同的样品,基质效应各不相同。有研究发现,基质效应可能是由于难挥发的化合物或表面积活性大的物质造成,其增加带电小液滴的粘度和表面张力,从而减少目标物达到检测器的离子数量而产生基质效应。基质效应很大程度取决于被分析化合物的性质,极性化合物的离子效率较非极性化合物更容易受到基质共萃取物的影响。

      1、超高效液相色谱-电喷雾串联四级杆质谱(UPLC-ESI-MS/MS),检测灵敏度高

      UPLC-ESI-MS/MS在多反应离子监测(MRM)模式下分离鉴定植物激素。该技术与气相色谱-质谱联用(GC/MS)技术相比,灵敏度高,选择性好,不需要衍生,前处理简单,化学试剂用量少,可以实现在植物样品的粗提取液中直接进行生理水平植物激素检测。

       2、固相萃取提取法能有效减小基质效应

      固相萃取(SPE)是一种结合了选择性保留、选择性洗脱等过程的分离技术。当复杂样品溶液通过吸附剂时,吸附剂会通过极性相互作用、疏水相互作用或离子交换等作用选择性地保留目标化合物和少量与目标化合物性质相近的干扰物,其他组分则透过吸附剂流出小柱然后用另一种洗脱能力更强的溶剂体系选择性地把目标物洗脱下来,从而实现对复杂样品的分离、纯化和富集。

     一般来说,基质效应是由不充分净化引起的,而基质效应可以简单通过减小进样量或稀释样品来解决,但同时也会影响方法的灵敏度而不易采纳。所以改进前处理方法、纯化样品、尽可能地减少提取液中的基质成分是有效、彻底地消除基质效应的方法。

经研究表明固相萃取是有效的方法,其中混合模式的固相萃取柱,较反相固相萃取柱和离子交换柱更能减少基质共萃取物,基质效应小。