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荧光定量

日期: 2018-09-06
浏览次数: 945

  原理:

  荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时监控反应过程。随着PCR 反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,结合相应的软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,计算待测样品初始模版的量。

  应用:

  实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃,运用该项技术,可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。

  服务内容:

  1. 客户提供样品及检测基因信息

  2. 样品抽提及反转录

  3. 引物及探针设计

  4. 标准品构建(针对绝对定量)

  5. PCR反应条件优化及引物验证

  6. PCR上机正式实验

  7. 实验数据分析及GraphPad专业绘图软件绘制柱状图

  交付内容:

  提供数据及实验报告,包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、RNA电泳图片、扩增曲线、溶解曲线及GraphPad专业绘图软件绘制柱状图。


业务范围:SYBR-Green染料法对DNA/RNA进行实时荧光定量PCR检测,包括mRNAmiRNA和DNA的相对和绝对定量分析。

相对定量通过2ΔΔCt法计算比较目的基因的表达差异,内参基因选择常用的GAPDHβ-actinRPL4

绝对定量需要先制备标准质粒进行等比例稀释,与待测目的基因同时进行PCR通过比对标准曲线计算出样品中特定基因的拷贝数、摩尔数或者微克数等。

 


RNA甲醛变性胶              荧光定量



DNA电泳                                          荧光定量



质粒双酶切(NedI & DraIII)        荧光定量



质粒双酶切(BamHI & SacI)                     荧光定量  



基因扩增曲线                  荧光定量




基因溶解曲线                   荧光定量






质粒标准曲线               荧光定量


      


        



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